什么是層析
層析基于不同物質(zhì)在活動(dòng)相和固定相之間的分配系數(shù)不同而將混合組分別離的技能。當(dāng)活動(dòng)相（液體或氣體）流經(jīng)固定相（多孔的固體或掩蓋在固體支持物上的液體）時(shí)，各組分因沿固定相移動(dòng)的速度不同而別離。該技能可用于微量樣品的剖析和大量樣品的純化制備。
層析（chromatography）也稱色譜法?；诒粍e離物質(zhì)分子在兩相（一為固定相，一為活動(dòng)相）中分配系數(shù)的細(xì)小差別進(jìn)行別離，是一種多級(jí)別離技能。當(dāng)兩相做相對(duì)移動(dòng)時(shí)，被測(cè)物質(zhì)在兩相之間進(jìn)行重復(fù)屢次別離，使原來(lái)細(xì)小的分配差異進(jìn)一步擴(kuò)大，使各個(gè)組分別離。這一別離方法效率高、效果好，能將各種性質(zhì)極相似的物質(zhì)彼此別離。
層析（chromatography）可分為多品種型。依據(jù)移動(dòng)相品種的不同，分為液體層析（chromatography）、氣體層析（chromatography）兩種。用作固定相的有硅膠、活性炭、氧化鋁、離子交換樹脂、離子交換纖維等，或是在硅藻土、纖維素等無(wú)活性的載體上附著適當(dāng)?shù)囊后w，也可使用其他物質(zhì)。
層析（chromatography）是蛋白質(zhì)別離純化的重要手法之一。一般來(lái)說(shuō)，待別離蛋白質(zhì)溶液（活動(dòng)相）經(jīng)過(guò)一個(gè)固態(tài)物質(zhì)（固定相）時(shí)，依據(jù)溶液中待別離的蛋白質(zhì)顆粒巨細(xì)、電荷多少以及親和力如何等，使待別離的蛋白質(zhì)溶液在兩相中重復(fù)分配，并以不同速度流經(jīng)固定相而達(dá)到別離蛋白質(zhì)的意圖。
分子篩層析又是什么，以及分子篩層析的工作原理
在蛋白質(zhì)別離純化中，使用最廣的層析法是離子交換層析和分子篩層析。
一、離子交換層析。蛋白質(zhì)和氨基酸相同，是兩性電解質(zhì)，在某一特定pH時(shí)，各蛋白質(zhì)的電荷量以及性質(zhì)不同，能夠通過(guò)離子交換層析得以別離。
二、分子篩層析。又稱凝膠過(guò)濾或體積排阻層析。層析柱內(nèi)填滿帶有小孔的顆粒，一般由葡聚糖制成。蛋白質(zhì)溶液加于柱之頂部，任其往下滲漏，小分子蛋白質(zhì)進(jìn)入孔內(nèi)，因而在柱中滯留時(shí)間較長(zhǎng)，大分子蛋白質(zhì)不能進(jìn)入孔內(nèi)而徑直流出，因此不同巨細(xì)的蛋白質(zhì)得以別離。
分子篩層析是使用有必定孔徑規(guī)模的多孔凝膠作為固定相。對(duì)混合物中各組分按分子巨細(xì)進(jìn)行別離的層析技能。具有分子篩效果的物質(zhì)許多，如浮石、瓊脂、瓊脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等。以葡聚糖凝膠使用最廣，商品名是sephadex類型許多，從G10到G200，它的首要使用規(guī)模是：
①分級(jí)別離各種抗原與抗體；
②去掉復(fù)合物中的小分子物質(zhì)。如除鹽、熒光素和游離的放射性同位素以及水解的蛋白質(zhì)碎片；
③剖析血清中的免疫復(fù)合物；
④分子量的測(cè)定。
分子篩層析柱的選擇一般依據(jù)別離樣品的品種和樣品的數(shù)量而定。純化蛋白質(zhì)時(shí)，柱床體積應(yīng)為樣品體積的25～100倍。去鹽、游離熒光素約為樣品體積的4～10倍。柱太短，影響別離效果。柱長(zhǎng)一些，別離效果好，但柱太長(zhǎng)，則延長(zhǎng)別離時(shí)間，樣品也稀釋過(guò)度。分子篩層析柱的內(nèi)徑也要選擇適當(dāng)。內(nèi)徑過(guò)細(xì)，會(huì)產(chǎn)生“器壁效應(yīng)”，即靠近管壁的流速要大于中心的流速影響別離效果。所以分子篩層析柱的內(nèi)徑和高度應(yīng)有必定的份額。對(duì)于除鹽來(lái)說(shuō)應(yīng)為1︰5～1︰25；對(duì)于純化蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)應(yīng)為1︰20～1︰100。
分子篩層析的裝柱進(jìn)程基本同離子交換層析柱。
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